Тиогликолевая микробиологическая питательная среда
- Тиогликолевая среда - используют для контроля стерильности различных биоматериалов, а также для культивирования широкого круга аэробных и анаэробных бактерий.
Приготовление править
Размешать 30 г порошка в 1 литре дистиллированной воды. Прокипятить до полного растворения частиц.
Для полного освобождения от всех видов микроорганизмов нужно стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин.
Остудить до 25°С и оставить для хранения в темном прохладном месте (при температуре ниже 25°С).
Примечание: если более, чем треть среды сверху стала розового цвета, ее можно один раз восстановить, прогрев в кипящей водяной бане или струе пара до исчезновения розовой окраски.
Принцип и оценка результата править
Эту среду предложил Бревер [1] для быстрого культивирования аэробов, а также анаэробов (ввиду добавления редуцирующего вещества и небольшого количества агар-агара). Американские специалисты [2][3] рекомендовали указанные среды для тестов на стерильность антибиотиков, биоматериала, пищевых продуктов, а также для определения фенолового коэффициента и спороцидных свойств дезинфектантов. Вместе с тем, среды предназначены для исследования прозрачных жидкостей и водорастворимых материалов.
Глюкоза, гидролизат казеина, дрожжевой экстракт, мясной экстракт и L-цистин дают питательные вещества для размножения бактерий. Тиогликолят натрия снижает окислительно-восстановительный потенциал, а также нейтрализует бактериостатический эффект соединений ртути и других тяжелых металлов, находящихся в исследуемом материале. Любое повышение концентрации кислорода сопровождается изменением цвета специального индикатора редокс-потенциала (резазурина) на красный. Низкий редокс-потенциал помогает поддерживать небольшое количество агара в среде.
Рост штаммов править
Рост штаммов через 48-72 часов при 35°С - обильный. Символом * отмечены культуры, которые можно инкубировать при 25-30°С в течение 2-7 дней.
- Bacillus subtilis*
- Candida albicans*
- Clostridium sporogenes*
- Micrococcus luteus*
- Bacteroides vulgatus* (сравнительно замедленный рост)
- Neisseria meningitidis
- Streptococcus pyogenes
Исследование биоматериалов на стерильность править
Для контроля стерильности лекарственных средств применяют тиогликолевую среду (или жидкую среду Сабуро).
Исследуемый препарат в количестве 1 мл засевают на вышеуказанные среды 1:4 (Метод прямого посева). При испытании лекарственных средств посевы в тиогликолевой среде ингибируют при температуре 37°С, а в среде Сабуро - 22°С.
Посевы просматривают ежедневно и по окончании периода инкубации. Наличие роста микроорганизмов в питательных средах оценивают визуально по появлению мутности, пленки, осадка и других микроскопических изменений. Выявленный рост микроорганизмов необходимо подтвердить микроскопированием мазков, окрашенных по Граму. Испытуемый препарат считают удовлетворяющим требованиям испытания на стерильность при отсутствии роста микроорганизмов.
См. также править
Примечания править
- ↑ Brewer, 1940, J. Am. Med. Assoc., 115:598.
- ↑ U. S. Pharmacopeia, 2002, USP 25/NF 20, Asian Edition, United States Pharmacopeial Convention, Inc., Rockville, MD.
- ↑ Cunniff P. (Ed.), 1995, Official Methods of Analysis of the Association of Official Analytical Chemists, 16th ed., AOAC, Washington, D.C.