Изучение микромира под микроскопом/§2

Приготовление препарата

Высушивание и фиксирование препарата

Для приготовления демонстративного препарата на середину чистого предметного стекла наносят небольшую каплю воды и с помощью бактериальной петли помещают в нее исследуемый материал. Материал равномерно распределяют на стекле таким образом, чтобы образовался тонкий мазок круглой или овальной формы размером 1-2 см2. Затем препарат высушивают либо при комнатной температуре на воздухе, либо в струе теплого воздуха высоко над пламенем горелки.

При фиксации исследуемого материала он прикрепляется к стеклу, и возрастает восприимчивость микробов к окраске. После фиксации производят окраску мазка.

Фиксация нагреванием

Наиболее простым и самым распространенным способом является фиксация жаром - нагреванием на пламени горелки: препарат несколько раз проводят через наиболее горячую часть пламени горелки.

Фиксация спиртом

Лучшим фиксатором является метиловый спирт. В метиловом спирте мазки выдерживают не менее 5 мин, а в этиловом и денатурированном спирте и смеси Никифорова — не менее 30 мин.

Окраска микроорганизмов

В естественном состоянии бактерии имеют такой же коэффициент преломления, как и стекло, поэтому они невидимы под микроскопом. Благодаря окраске можно изучать их морфологические особенности.

Простой способ

При простой окраске, которая позволяет быстро изучить морфологические особенности микробов, обычно используют только один краситель, чаще всего красного цвета - фуксин (окраска производится в течение 1-2 мин) или синего цвета - метиленовый синий (время обработки мазка краской 3-5 мин).

Процедура: на высушенный препарат наливают краситель, затем смывают водой, высушивают.

Сложный способ

Методика окраски по Граму заключается в последовательной обработке фиксированного мазка:

1. окраске генцианвиолетом (краситель фиолетового цвета) через фильтровальную бумагу (1-2 мин)
2. обработке раствором Люголя (1 мин)
3. обесцвечивании спиртом (0,5-1 мин - до отхождения фиолетовых струек краски)
4. промывании водой
5. окрашивании фуксином (1-2 мин).

Сущность метода состоит в том, что грамположительные бактерии удерживают комплекс краситель - йод и не обесцвечиваются спиртом, грамотрицательные не обладают этим свойством, т. е. обесцвечиваются спиртом (дифференцирующим веществом) и докрашиваются фуксином. В результате грамположительные бактерии приобретают фиолетовый цвет, грамотрицательные - красный.